全部产品分类

首页 >> 试剂 >>试剂盒 >>标记试剂盒 >> CCK-8试剂盒,CT-K-1
试剂
详细说明

CCK-8试剂盒,CT-K-1

去手机购买
现价
¥140 ¥140.00
品牌
炎熙生物
货号
CT-K-1
规格
100次
货期/天
现货
购买数量
- +
总计¥140
收藏

上海炎熙生物科技有限公司

  • 联系我们
  • 华经理:15921694156
  • 点击这里给我发消息
产品说明

下载CCK-8试剂盒说明书


CCK-8试剂盒

Cell Counting Kit -8



货号

规格

价格

   CT-K-1

1毫升,100次

140元

   CT-K-5

5毫升,500次

480元

CT-K-10

10毫升,1000次

920元


检测原理

Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒),是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

WST-8属于MTT的升级产品,能在电子载体1-甲氧基PMS的作用下被还原成水溶性甲臜产物,生成的甲臜量与活细胞数量成正比,因此颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值,可以反映活细胞数量。


CCK-8法与普通的MTT法相比,具有显著特点:

★灵敏度高,数据可靠,重现性好

★操作简便,省时省力

★水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞

★无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低

★为1瓶溶液,毋需预制,即开即用

★适合于高通量药物筛选

CCK-8用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验


CCK-8方法的优势

CCK-8法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较

检测方法

MTT

XTT

WST-1

CCK-8

甲臜产物的水溶性

差(需加有机溶剂溶解后再检测)

产品性状

粉末

2瓶溶液

溶液

1瓶溶液

使用方法

配成溶液后使用

现配现用

即开即用

即开即用

检测灵敏度

很高

很高

检测时间

较长

较短

较短

最短

检测波长

560-600nm

420-480nm

420-480nm

430-490nm

细胞毒性

高,细胞形态完全消失

很低,细胞形态不变

很低,细胞形态不变

很低,细胞形态不变

试剂稳定性

一般

较差

一般

很好

批量样品检测

可以

非常适合

非常适合

非常适合

便捷程度

一般

便捷

便捷

非常便捷


保存条件:

4?C避光保存一年有效, -20?C避光保存两年有效。 避免反复冻融。


CCK-8试剂盒操作说明

CCK-8溶液可直接加入到细胞中,不需要与其它组分预混。由于CCK-8溶液非常稳定并且细胞毒性很小,所以可以进行长时间孵育,例如孵育24-48小时。

在进行以下实验之前,可先设置空白对照孔,仅加入相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液,不加入细胞。

方法一制作标准曲线(测定细胞具体数量)

1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。

2、按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议3-6个复孔。

3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后按培养基体积的10%加入CCK-8试剂,培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间。)

方法二细胞活性检测

1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37,5% CO2)。

2、向每孔加入10 μLCCK-8溶液。

3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

方法三细胞增殖-毒性检测

1、在96孔板中加入90μL的细胞悬液。将培养板放在培养箱预培养24小时(37℃,5% CO2)。

2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。

3、将培养板在培养箱中孵育适当的时间(例如:6122448小时)。

4、向每孔加入10μLCCK-8溶液。

5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。


活力计算:

细胞活力(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(不加药)-A(空白)] ×100

A(加药):具有细胞、CCK 溶液和药物溶液的孔的吸光度

A(空白):具有培养基和CCK 溶液而没有细胞的孔的吸光度

A(0 加药):具有细胞、CCK 溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力


注意事项:

1,由于使用96孔板进行检测,如果细胞培养时间较长,一定要注意蒸发问题。一方面,由于96孔板周围一圈最容易蒸发,可以采取弃用周围一圈的办法,改加相同量的PBS、水或培养液;另一方面,可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方,以缓解蒸发。

2,本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应, 所以还原剂(例如一些抗氧化剂)会干扰检测。如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。培养基中酚红和血清的吸光度,在计算时通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。

3,有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK

×