全部产品分类

首页 >> 技术服务 >>细胞 >>细胞转染 >> 过表达载体构建 抑制载体构建 载体构建
技术服务
详细说明

过表达载体构建 抑制载体构建 载体构建

去手机购买
品牌
广州辉园
货期/天
20
购买数量
- +
总计¥0
收藏

广州辉园苑医药科技有限公司

  • 联系我们
  • 王小姐:13535238626
  • 点击这里给我发消息
产品说明

(1)过表达载体构建


服务简介


       基因、miRNA、LncRNA等在细胞内表达具有时空特异性,表达受到严格调控,如LncRNA及circRNA表达量天然偏低。然而,将目的片段插入慢病毒载体,目的基因可被整合到细胞基因组,高效启动子可长期而稳定的上调宿主细胞表达量,有利于深入研究基因、miRNA、LncRNA及circRNA的功能和作用机制。

       我们的目的基因过表达载体构建基于慢病毒系统,一般采用CMV启动子驱动的pLV.O-CopGFP-Puro载体。您只需提供目的基因的Gene ID,我们将按照您的要求完成目的基因过表达载体的构建提供给您高质量的基因过表达质粒。HYY不止提供过表达慢病毒载体构建服务,我们也提供非慢病毒的常规过表达载体构建服务。


过表达慢病毒载体质粒骨架示意



实验流程





 

(2)抑制载体构建


       RNA干扰(RNAi)是一种RNA介导的基因沉默机制。在哺乳动物细胞中,可通过转入能与目的基因配对的双链RNA来实现,如siRNA、短发夹RNA(shRNA)。目前,主流的方法是将shRNA构建于载体中,利用细胞内的Dicer酶生成相应的siRNA,发挥RNAi的作用。一方面,shRNA慢病毒载体比体外合成的siRNA更为稳定,另一方面,经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达。




RNAi干扰机制示意



抑制慢病毒载体质粒骨架示意


       我们的RNAi抑制载体构建基于慢病毒表达系统,一般采用U6启动子驱动的pLV.i-CopGFP-Puro载体,您只需提供目的基因的Gene ID,我们将按照您的要求完成目的基因过表达载体构建,提供给您高质量的基因过表达质粒。HYY不止构建抑制载体,也提供靶点筛选、干扰效率验证及稳定细胞筛选和验证服务。



实验流程



RNAi抑制载体构建流程示意




(3)CRISPR-Cas9载体构建

 

       成簇的短的间隔回文重复序列CRISPR二型系统源于细菌的一套特定的免疫系统,通过基因组工程改造已优化成为简单依赖于可个性化设计的核酸酶Cas9和可靶向任意靶点的gRNA。由于其简便性和适应性,CRISPR-Cas9系统已成为基因组编辑的热门技术。将Cas9与sgRNA共表达,可实现基因敲除(Knock-out)、敲入(Knock-in)、基因表达激活(Activation)、抑制(Repression)、敲低(Knock-down)。



基因编辑的应用范围




CRISPR-Cas9工作机制

 

       随着CRISPR-Cas9基因编辑技术的出现,基因定点敲除的难度大幅下降。现在我们可提供基于CRISPR-Cas9敲除慢病毒载体构建服务。 您只需提供目的基因的Gene ID或已设计好的sgRNA,我们将按照您的要求完成目的基因敲除载体的构建,提供给您高质量的基因敲除质粒。HYY也提供包括基因敲除靶点设计,基因敲除效率验证,慢病毒包装及感染等服务。



CRISPR-Cas9慢病毒载体质粒骨架示意


×