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上海万生昊天生物技术有限公司

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产品说明

RNAi技术不仅可作为研究功能基因的强大武器,并且可以抑制致病基因的表达并作为一种潜在的治疗方式用于疾病的治疗。RNAi实验的成功关键在于以下几点:
    ●  靶序列的选择和siRNA的设计
    ●  细胞系和细胞培养体系
    ●  转染条件
    ●  靶基因的mRNA的积累和替代比率
    ●  目的蛋白的半衰期
    ●  mRNA、蛋白质和表型水平上的精确分析
     万生昊天RNAi服务团队的专业的技术服务能够帮助客户最大化实现RNAi技术应有的价值和避免一些实验错误。我们的研究队伍将和您一起开发更加广泛有效的的解决方案。
 RNAi服务包括三个方面:
    ●  化学合成RNAi服务
    ●  载体介导的RNAi服务
    ●  慢病毒介导的RNAi服务
    万生昊天 RNAi 服务应用领域:功能基因组学、基因治疗、药物靶筛选、细胞信号传导通路分析、蛋白质相互作用等。 
    万生昊天为开发和制备这三种siRNA提供服务,每个方法都有自己的优点和缺点。具体如下:

siRNA的成熟形式具有以下结构:
5’p NNNNNNNNNNNNNNNNNNN TT 3' 
3'TT NNNNNNNNNNNNNNNNNNNp5’
化学合成的siRNA具有如上的结构。它包含19-21 bp并且它的反义链完全与mRNA 互补,从而mRNA被沉默。3’端增加了其对抗RNA酶的阻力。
在体内表达的siRNA (从一个常规的shRNA表达载体或慢病毒shRNA表达载体)是从基因转录来编码shRNA。shRNA是siRNA的前体,在细胞中被加工成成熟的siRNA 。其3' 端通常是UU
下面的表格提供了一种比较这两种类型的siRNA的通用方法


  siRNA  shRNA   vshRNA
  客户接收  合成的双链
  RNA寡核苷酸
  shRNA 
  基因插入的载体
  vshRNA载体或
  慢性病毒颗粒
  干扰持续  <72小时  长达10天  > 30天
  细胞系的要求  高转染效率细胞(> 70%)  转染效率低的细胞都可以。   几乎所有的细胞
  转染干扰实验  是  是  是
  诱导干扰  否  是  是
  组织特异性干扰  否  是  是
  一次性制备成本  低  中  高
  可否在客户自己的实验室里再生产  否  是  是
  最适合  目标位点筛查
  短期shRNA的控制
  > 72小时 
  低转染细胞
  稳定的shRNA细胞系保持长期的基因沉     默


    要沉默一个没有目标位点的基因,万生昊天的TripleStrike定制siRNA套餐提供了最佳的解决方案。套餐提供设计和制备三种靶向一个基因的三个不同区域的SiRNA并且都能控制SiRNA。客户只需要提供给我们一个基因查询号(或序列)。我们保证这个基因会被沉默。该全包服务适用于所有三种形式的siRNA,化学合成RNA寡核苷酸,shRNA载体病毒性shRNA 



 

Knockdown Rate高于98%

    万生昊天 已设计并合成了数百段siRNA。我们坚持与时俱进,始终保持学术领域中最新知识与原已精深的设计算法的血脉联系。更有高标准的产品质量(每种siRNA均经PAGE纯化),使我们的TripleStrike套餐成功率高达98%以上。其中,


·被3种siRNA都沉默的基因占18%

·被3种siRNA中的2种沉默的基因占56%

·被3种siRNA中的1种沉默的基因占28%

对三种siRNA都无法沉默的基因(不足2%),主要原因是高GC含量或目的基因与其它基因同源性高,从而导致非特异性沉默。


    像所有其他的万生昊天服务一样,在同行业中,我们以最优惠的价格提供高品质的RNAi服务。例如,我们的siRNA寡核苷酸都以最高纯度----- PAGE纯化交付。但是,我们的价格仅仅是其它大部分公司的50%左右。

我们的科学家们从起步阶段就一直在研究RNAi。多年来,我们已经开发出最先进的siRNA设计算法之一。我们独特而强大的的TripleStrike siRNA Package可以提供充分的保证----如果你的基因沉默失败,我们会寄给你一个重新设计的产品或全额退款。


化学合成siRNA项目服务
    ●  RNAi 双链设计:客户需要与我们共同讨论实验方案,并提供靶基因名称、序列或GeneBank ID等。
    ●  siRNA合成
    ●  根据客户要求可进一步转染哺乳动物细胞;
    ●  检测抑制效果:荧光定量PCR检测mRNA表达情况、Western Blot检测蛋白表达情况。
    ●  提供实验报告:siRNA序列、构建载体的测序报告;荧光定量PCR检测报告、Western Blot图片等。

价格信息

  质量数量价格 (人民币)
经PAGE 纯化的退火产物20 nmol (8 OD)询价
40 nmol (16 OD)询价
100 nmol (40 OD)询价
* 1 OD  ~  2.5 nmol 二聚体 (21mer)


产品信息

纯度经过PAGE 纯化。纯度 > 98%
质量控制PAGE能检测到1个碱基对的差别,由此可保证100%的准确度。
数量测定分光光度计
长度19-21 bp
规格退火产物冻干粉
包装siRNA 寡核苷酸(2 OD/管),通用缓冲液、无RNase的纯水
合成报告基因名称、寡核苷酸名称、寡核苷酸序列、PAGE结果,以及OD数
储存粉末状:常温 1-2周; 4℃ 2-4周; -20℃ 6 个月; -70 ℃ > 1年
交付10 – 12工作日


TripleStrike siRNA全包套餐:保证任何基因的沉默效果
1. 三种siRNA二聚体
siRNA二聚体数
目的基因
数量
纯度
3
客户提供
10 nmol/个二聚体
PAGE纯化的退火产物
2. siRNA阳性对照
siRNA二聚体数
目的基因
数量
纯度
1
GFP或GAPDH
2.5 nmol
PAGE纯化的退火产物
3. siRNA阴性对照
siRNA二聚体数
目的基因
数量
纯度
1

2.5 nmol
PAGE纯化的退火产物
客户提供
gene bank ID(查询号)或基因序列
(客户也可提供自己设计的三种siRNA序列)
保证
三种siRNA中至少有一种在mRMA水平上的沉默效率≥70%
(对于客户自己设计的三种siRNA序列,不保证沉默效果)
价格与交付
询价
10-12个工作日后交付
*所有siRNA寡核苷酸均为21mer,含有一个19mer的核心与3端' dTdT序列

载体介导的RNAi项目服务 
●  shRNA设计:客户需要与我们共同讨论实验方案,并提供靶基因名称、序列或GeneBank ID等。
●  shRNA合成
●  shRNA载体的选择,万生昊天提供pGPU6/GFP/Neo、pGPH1/GFP/Neo等多种载体
●  根据客户要求可进一步转染哺乳动物细胞
●  检测抑制效果:荧光定量PCR检测mRNA表达情况、Western Blot检测蛋白表达情况
●  提供实验报告:shRNA序列、构建载体的测序报告;荧光定量PCR检测报告、Western Blot图片等。

 
TripleStrike 定制 shRNA 套餐
这个全包服务提供了针对一个基因三个不同区域的3种shRNA载体和两种对照shRNA载体的设计和构建。客户只需要提供给我们一个基因查询号(基因库ID)或基因序列,我们保证这个基因的沉默效果。

套餐包括设计与构建
1.三种shRNA表达载体
shRNA载体数量3
靶基因客户指定
数量20微克/克隆
纯度转染级
2.阳性对照shRNA
shRNA载体数量1
靶基因GAPDH
数量20微克
纯度转染级
客户提供:基因库ID(查询号)或者基因序列(客户也可以提供自己设计的三种shRNA序列)
保证三种shRNA中至少有一种会在mRNA水平产生 70%的沉默效果(对客户自己设计的不提供保证)
价格: 询价
交货周期: 3-4周

shRNA表达载体构建服务
服务代码构建时间价格(¥)
Rsh-01shRNA载体的客户提供shRNA序列3-4 周询价
Rsh-01PRsh-01
+阳性对照shRNA载体(20微克)
+阴性对照shRNA载体(20微克)
+用于阳性对照的RT-PCR引物(0.5 OD)
3-4 周询价
Rm-01shRNA载体的客户提供miRNA序列4-5 周询价
Rm-01PRm-01
+阴性对照miRNA的载体(20微克)
+用于阳性对照的RT PCT引物(0.5 OD)
4-5 周询价
 ● 阳性对照:GAPDH。
 ● 所有被交付的载体都是极度纯化并且易被转染的
 ● 我们提供免费设计服务。

载体和插入选项
启动子H1或U6
报告基因GFP
抗性潮霉素或新霉素
shRNA的插入  ● 25(stem)+ 4(loop)结构, 25bp的目标位点
  ● micro-30 miRNA

慢病毒介导的RNAi项目服务 
●  根据客户需要进行慢病毒构建
●  根据客户需要进行病毒颗粒的包装
●  根据客户需要进行RNAi效果的检测

通过携带siRNA基因的慢病毒颗粒感染细胞,siRNA能够被传递到细胞中。然后基因被整合到宿主细胞的染色体DNA上,并且被不断表达以达到长期的基因沉默(> 30天)。慢病毒颗粒可以被转导到各种细胞中。比普通的shRNA相比,慢病毒shRNA的主要优点是可以传递到分裂和非分裂细胞中,以实现长期稳定的基因沉默效果。

vshRNA制备流程通过以下流程图所示:

构建vshRNA载体和制备病毒颗粒是通过vshRNA实现基因沉默的两个基本步骤。万生昊天提供这两种服务:
1、vshRNA载体的构建服务
定制慢病毒shRNA载体的构建
此服务适用于已经有一个序列的shRNA项目。如果你需要从我们的设计中得到保证结果,请参阅我们的TripleStrike套餐。
构建vshRNA载体以便插入到载体中的合成的DNA寡核苷酸(60-110bp)中去。这个看似简单的实验其实比预期的麻烦得多,原因如下:
●  合成的长寡核苷酸(>50mer)是很容易出错的
●  shRNA的寡核苷酸通常形成发夹结构,这是很难克隆到载体中的
●  发夹结构很难被测序
如果你已经有一个shRNA序列,我们可以为您构建vshRNA载体。这可以省去您自己进行构建所需要花费的时间和不可避免的麻烦。我们提供:
●  为shRNA特异性设计的大量万生昊天慢病毒载体
●  报告基因的启动子和抗生素耐药性的多种选择
●  免费设计服务
●  保证序列的准确性
●  TripleStrike vshRNA套餐,保证抑制您的基因(见下文)
●  价格:1-2个构建,每个构建请询价(订购>2个,提供1 0%的折扣)
●  3-4周内交付
 
vshRNA TripleStrike载体构建套餐
与我们的siRNA合成和常规的shRNA载体构建服务类似,我们的TripleStrike定制vshRNA载体构建套餐提供设计和构建针对一个基因的三个不同区域的三种vshRNA载体和一个可控制的shRNA载体。客户只需提供给我们一个基因查询号(基因库ID)或基因序列。我们向您保证,这个基因会被沉默。

套餐包括设计和构建:
1、三种shRNA表达载体
shRNA载体数量3
靶基因客户指定
数量20微克/克隆
纯度转染级
2、阴性对照shRNA
shRNA 载体数1
靶基因GAPDH
数量20微克
纯度转染级
  客户提供
  基因库ID(查询号)或基因序列和一个空的载体
(顾客也可以提供自己设计的shRNA序列)
  保证
  三种shRNA中至少有一种会在mRMA水平上产生 70%的沉默效果
(对客户自己设计的序列不予保证)
  价格: 询价
  交货时间: -4周

2、vshRNA慢病毒颗粒制备服务
    这个服务内容包括vshRNA载体的构建和病毒颗粒的制备。客户收到高滴定度的vshRNA慢病毒颗粒易于感染宿主细胞并且使目标基因沉默。
    如果您已经有了vshRNA载体,我们就可以为您制备病毒颗粒。如果你没有载体,我们可以帮你设计一个shRNA序列,构建一个vshRNA载体,然后制备病毒颗粒。对于细节和价格,请给我们发电子邮件进行询价(service@wshtbio.com)。
vshRNA慢病毒颗粒TripleStrike制备套餐

服务代码vshRNA-TP-1
套餐包括1、siRNA序列设计
2、vshRNA载体构建
3、shRNA慢病毒颗粒的制备
客户收到1、针对一个基因的三个不同区域的三种vshRNA慢病毒颗粒(10 ^ 7 TU /每个)
2、三种vshRNA载体  
客户提供靶基因序列或其基因库ID(查询号)和空白载体。
保证三种shRNA中的至少一种会产生在mRNA 水平的> 70%的沉默效果
交付时间6-8周
价格(¥)询价
服务代码vshRNA-TP-2
套票包括vshRNA-TP-1,再加上一个大剂量的vshRNA病毒颗粒(2×10 ^ 8 TU)。大剂量的序列是基于vshRNA-TP-1基因沉默的结果。
价格(¥)询价

服务简介

高质量RNA 是基因获取的前提条件。万生昊天RNA提取对象涵盖了动植物组织、血液、细菌、真菌及包括石蜡、淤泥、水样等特殊样品,可以为客户提供高质量的RNA 样品,满足客户文库构建、基因调取、分子标记、基因杂交等各种科研需求。

订购信息

服务项目说明周期报价
RNA提取提供电泳图片、浓度及纯度值。1周询价
RNA提取+反转录RNA提供电泳图片、浓度、纯度值。1周询价

注:报价不含运输及干冰费用

客户提供

提供样品

菌样:饱和浓度样品不少于1 ml,其它菌样不少110 个菌;

土壤淤泥样:不少于100 g 样品;

血液样:全血不少于300 μl;

动物组织:不少于200 mg;

植物根茎叶等组织:不少于500 mg 。
 

最终交付

交付成品

cDNA 或RNA 样品

交付报告

提取的质量报告(包括电泳图、浓度、质量检测等数据)。


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