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蛋白表达与纯化

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上海万生昊天生物技术有限公司

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产品说明

    总的来说,原核表达体系的性价比最高。可用于生产稳定同位素标记的NMR蛋白样品,成本显著低于多肽合成。提供科研级和工业级服务。结合我们的蛋白质复性服务,我们已经成功表达纯化了上百个活性蛋白。

研究规模
交付:相应纯度的> 3毫克的纯化的目标蛋白和产品报告。如果产量超过3mg,我们将把所有的产品寄给您。
该服务包括两个阶段
第1阶段
培养少量体积的大肠杆菌,测试并优化表达效果和溶解性
在不同的大肠杆菌群中测试表达效果,从而优化目标蛋白的表达程度和溶解性。如果表达程度很低或者目标蛋白聚集成包涵体,结果将报告给客户并建议下一个步骤。在目标蛋白形成包涵体的的情况下,我们会建议额外的蛋白复性阶段。

价格:如果项目能进行到下一个阶段就免费。
         如果项目终止在此阶段请询价。

第2 阶段
培养2升的大肠杆菌来纯化表达的目标蛋白
通过在载体构建阶段融合亲和标记如(6x His)标记到目标蛋白,纯化更加有效并且进行的更快。然而对小部分蛋白来说,亲和标记会影响它们的结构并且反过来会影响它们的功能。我们同时提供亲和标记和非标记蛋白的服务。

A. 亲和标记蛋白(His,GST和MBP标记)
第一步亲和柱纯化
保证纯度> 80%:询价

亲和柱+ 超过两个纯化步骤
保证纯度> 90%:询价

亲和柱+超过三个纯化步骤
保证纯度> 95%:询价 
B. 非亲和标记天然形式蛋白
没有标记的蛋白可以通过直接通过表达非标记的基因获得,或者从纯化的目标蛋白切除亲和标记。基于表达程度、纯度、聚集状态和其它属性,每个蛋白都会设计不同的计策和纯化方案。请通过电子邮件进行询价。

大规模

对于大量的蛋白产品,我们通过发酵罐培养10、20、50或者100升高密度的细胞,并且从一个单独的批次中纯化10g 的蛋白。请给我们发电子邮件进行询价。

长期供应蛋白的优惠方案


(1)相同的蛋白第二次订购给予20%的折扣,第三次订购给予30%的折扣。


(2)对原始蛋白的突变蛋白提供15%的折扣,从第二个订单开始,相同的突变蛋白将享受30%的折扣。


总体解决方案
服务蛋白质系统规模
>表达
>纯化
>复性
>特性
>靶基因合成
>载体构建
>突变
>含亲和标签的蛋白
>无标签的天然蛋白
>聚集或难溶的蛋白
>膜蛋白
>困难蛋白
>15N/13C标记蛋白
>细菌
>酵母
>昆虫
>哺乳动物
在体外翻译
 
>科研规模
 
 
>工业级规模


服务亮点


细菌表达系统
主要指大肠杆菌 ,是性价比最高的蛋白表达系统。不论是哪个物种,我们发现~80%的蛋白质,都可以子在大肠杆菌中表达和纯化得到活性形式 。在蛋白表达和复性方面我们有几十年的经验。  详情请点击

酵母、昆虫和哺乳动物表达系统

有些蛋白是很难在大肠杆菌的表达得到活性形式的,比如含翻译后修饰的蛋白,多个domain的蛋白,多个亚基的蛋白。对于这些蛋白,我们提供酵母,昆虫或哺乳动物细胞的蛋白表达和纯化。 详情请点击                                                     

蛋白复性
很多蛋白在超量表达时往往形成包涵体。这时往往需要进行复性处理。复性后蛋白的检测技术十分成熟,包括动态光散射,CD和荧光光谱。详情请点击

13C/15N标记
13C/15N标记的蛋白质样品是NMR和MS研究中必不可少的。我们提供统一标记或位点特异性标记的蛋白样品制备服务。      详情请点击

蛋白特性

>分子量测定

>纯度测定

>稳态性测定:绝对稳定性和相对稳定性

>通过CD测定蛋白结构

>聚集性

>结合动力学             

蛋白表达优惠方案
(1)同一蛋白第二次订购给予20%的折扣。第三次订购给予30%折扣;
(2)对原始蛋白的突变蛋白提供15%的折扣。从第二个订单开始,相同的突变蛋白将享受30%的折扣。
*本折扣不适用于需要重新纯化方案的突变蛋白,因为蛋白属性的变化是由突变引起的。  
询价

我们的服务是分阶段式的。请通过电子邮件(service@wshtbio.com)提供给我们您的项目的基本信息(序列、数量和纯度要求)连同一些其它信息,比如目标蛋白的结构、溶解度、和稳定性,有目标蛋白的表达和纯化相关信息。
我们将提供给您一个详细的实验方案与报价。


对于很难从大肠杆菌中获得活性形式的蛋白,我们提供酵母,昆虫或哺乳动物细胞的真核表达系统。

宿主细胞的选择
影响因素包括:翻译后修饰,蛋白质来源,表达和纯化的历史记录,成本,亲和标签,产量,纯度,载体和基因。在成本方面,顺序是酵母<昆虫<哺乳动物。产量的顺序恰好相反。

小试

宿主细胞确定后,首先需要在不同的细胞株里表达以优化靶蛋白的表达水平。如果表达水平太低以致无法产生足量的蛋白质或者靶蛋白不能以生物活性形式表达,都会告知客户,同时建议选择替代方案。  

蛋白生产,研究规模或大规模
研究规模:1升细胞培养
大规模:5,10, 20和50升的培养



请给我们发电子邮件进行询价(service@wshtbio.com)。

 优惠方案


对于需要长期供应的蛋白项目,我们提供额外的折扣: 

(1)相同的蛋白第二次订购给予20%的折扣。第三次订购给予30%折扣

(2)对原始蛋白的突变蛋白提供15%的折扣。从第二个订单开始,相同的突变蛋白将享受30%的折扣。

*本折扣不适用于需要重新纯化方案的突变蛋白,因为蛋白属性的变化是由突变引起的。


    超过50%的蛋白在大肠杆菌中表达形成成不溶性的包涵体。形成包涵体的蛋白通常是那些高度表达的蛋白。重新使包涵体具有生物活性结构是低成本获得足量样品的有效途径。万生昊天提供恢复靶蛋白质天然构象的复性服务。复性技术包括动态光散射(DLS)和其他引导复性进程的方法。 


标准protocol

    虽然有一些蛋白复性的基本的条件,但是每个蛋白的具体条件无法预测。各个蛋白的溶剂条件都不一样,包括盐,pH值,去污剂和各种添加剂。包括复性途径和复性速率的动力学过程也是至关重要的。不可能去也没必要去尝试所有条件的组合。多年来,经过大量的测试,我们发现了几个在复性中的关键因素。在此基础上,我们建立了一个标准的复性protocol。
对于复性项目,我们会首先尝试标准protocol的三种条件。迄今为止,我们已经成功复性了约65%的蛋白质。我们通过蛋白的溶解度判断复性效果。



定制protocol

     经标准protocol处理仍无法复性的情况下,可进行定制服务,筛选18个复性条件。复性成功的样品会先寄小样给客户进行活性检测,并根据客户反馈扩大复性规模。也可以由我方进行活性检测。


复性分析

    一般通过溶解性检测复性效果。如果一个蛋白能在溶液中保持稳定,复性就是成功的。但是很多复性后的蛋白仍然是无生物活性的。这有可能是因为蛋白形成了可溶性的寡聚体或者蛋白仍然处于展开/错误折叠构象。

    如果必要,万生昊天将应用DLS(动态光散射)、分子排阻色谱法和圆二色谱分析复性蛋白。分析结果有助于恢复靶蛋白天然构象和生物功能。


报价

1. 对于蛋白质复性项目,请给我们发电子邮件询价:service@wshtbio.com 

2. 对于已和我们签约的蛋白表达和纯化项目,如果蛋白在小试时不溶,我们会发给您一个复性的单独报价以及项目进展报告。


稳定的同位素标记的蛋白和多肽是NMR和Mass研究必不可少的。制备这样的样品费时费力,并且在一个普通的生化实验室里通常很难完成。特别是位点特异性标记,片段标记或者是部分标记同位素的样品。万生昊天提供制备标记蛋白或者多肽样品的服务。


 

蛋白标记

保证至少一个NMR样品(0.5ml体积 0.5mM)


作为蛋白表达和纯化服务的一部分,我们提供从基因合成、基因克隆到最后样品制备的全方位的服务。除了统一标记外,我们也提供详细研究蛋白结构和功能的片段标记和位点特异性标记服务。


统一标记



    15N     15N/13C
   组氨酸标记蛋白    纯度>90%
    纯度>95%
    询价    询价
    无标记蛋白     纯度>90%
    纯度>95%
    询价    询价

交付:至少一个达到或更高纯度的NMR样品。如果最后产量有剩余,我们会把它们都寄给您。


位点特异性标记和片段标记

我们开发了一项用特殊方式标记残基的技术。同时绝对没有跟其它残基进行交叉标记。只有需要的位点被标记。请把您的蛋白通过电子邮件(service@wshtbio.com)发给我们以得到评估和报价。
 

多肽标记

保证至少一个NMR样品(0.5ml体积 0.5mM)


统一标记



    15N    15N/13C
    重组多肽    纯度>90%
    纯度>95%
    询价     询价
    合成多肽    请给我们发电子邮件询价(service@wshtbio.com)

位点特异性标记

同位素标记的氨基酸被包括进多肽合成过程。请给我们发电子邮件询价。


蛋白分子量

方法:

1、 凝胶电泳

2、 分子排阻色谱法

3、 质谱



蛋白样品纯度

方法:

1、 凝胶电泳

2、 Western blot

3、 高效液相色谱(HPLC) 

蛋白稳定性

1、 蛋白质展开的自由能变化△G,蛋白在液体中介于展开和折叠状态间的平衡常数。
这两个参数可以评估蛋白对变性条件的承受能力,比如温度、尿素浓度。也可以用来比价两个蛋白的稳定性。我们称它为绝对稳定性。

2、 在实际条件下的蛋白质的稳定性。
在一定条件下,蛋白质的结构和功能随时间的变化而变化。它决定了一个活性蛋白质的半衰期。我们称它为相对稳定性。

蛋白质聚合

一些蛋白形成低聚合物但是仍然是溶解的。因此这种聚合是肉眼不可见的。我们通过两种方法来确定蛋白质的聚合:


1、 分子排阻色谱仪

2、 动态光散射(DLS)

圆二色谱测定蛋白质结构(CD)

圆二色谱是一种测定蛋白质结构的常用方法。它可以测定

1、 二级结构,特别是蛋白质中的α-螺旋结构的含量

2、 蛋白质是否是展开的

3、 蛋白质的稳定性

蛋白质-配体结合和蛋白质-受体结合

我们主要通过荧光的方法来测定蛋白质-配体的相互作用,包括荧光强度和荧光偏振(极化)。我们测定结合的Kd、Ki(基于竞争性结合)和IC 50 。

询价

如果您需要以上服务的价格,请把您的项目通过电子邮件发给我们:service@wshtbio.com.

我们会回复给您一个包括详细实验计划、数据分析方法和预期结果的询价。


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