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扫描电镜(SEM)检测

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北京嘉美臻元生物技术有限公司

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产品说明
、实验技术简介
扫描电镜(Scanning Electron Microscope;SEM)是介于透射电镜和光学显微镜之间的一种微观性貌观察手段,可直接利用样品表面材料的物质性能进行微观成像。扫描电镜的优点是,有较高的放大倍数,20-20万倍之间连续可调;有很大的景深,视野大,成像富有立体感,可直接观察各种试样凹凸不平表面的细微结构;试样制备简单。 目前的扫描电镜都配有X射线能谱仪装置,这样可以同时进行显微组织性貌的观察和微区成分分析,因此它是当今十分有用的科学研究仪器。
 
 
 
二、实验技术原理
扫描电镜是在加速高压作用下将电子枪发射的电子经过多级电磁透镜 汇集成细小的电子束。在末级透镜上方扫描线圈的作用下,使电子束在试样表面做光栅扫描(行扫+帧扫)。入射电子与试样相互作用会产生二次电子、背散射电 子、X射线等各种信息。这些信息的二维强度分布随试样表面的特征而变(这些特征有表面形貌、成分、晶体取向、电磁特性等等),将各种探测器收集到的信息按 顺序、成比率地转换成视频信号,再传送到同步扫描的显像管并调制其亮度,就可以得到一个反应试样表面状况的扫描图像。如果将探测器接收到的信号进行数字化 处理即转变成数字信号,就可以由计算机做进一步的处理和存储。
 
三、实验操作流程
1、取材
2、固定
3、漂洗
4、脱水
5、置换
6、干燥
7、镀膜
8、扫描电镜观察,拍片
 
四、实验注意事项

1、客户提供
  1)细胞,数量要求:10^6次方以上。生长在培养皿或培养板上细胞取材,若是悬浮的细胞将细胞转移到尖底 EP管里直接离心,贴壁细胞就先倒出培养液,用胰蛋白酶消化或用细胞刮刮下,而后带培养液一起低速离心,800-1200 转/分钟,离心 5-10 分钟使细胞沉淀成团,离心完后倒出培养液,沿壁缓慢加入电镜固定液(1.5%-2.5%中性戊二醛),注意不要把细胞团打散。4℃下固定 15 分钟或以上再送检。若细胞团太小,注意要用1ml 甚至 0.5ml 尖底 EP 管来进行固定、保存。
 
  2)肌肉:观察纵切面时沿着肌束方向,用锋利的刀片或剪刀在取出的组织一边取出 1-3 条细长的肌束,横截面约 1mm*1mm,投入到 2-8℃的电镜固定液(2.5%中性戊二醛)里。若有条件,为防止肌肉收缩变形,可将取出的肌束贴在载玻片毛玻璃一侧,使其略微伸展。再将贴好标本的载玻片放入戊二醛中进行固定。若无,则可取出长条状组织后,垂直缓慢放入固定液中,悬空在固定液里稍等 3 秒再放入。
 
  3)植物、昆虫等密度比固定液低的样品:必须先用针筒或抽真空仪器先抽气,再使标本沉入固定液中。
 
2、交付标准
  1)扫描照片、读片分析
  2)完整项目报告(材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果)
 
 
3、其他
1、含有水分的样品(多孔/镶样样品)应先烘干除去水分。
2、表面受到污染的试样,要在不破坏试样表面结构的前提下进行适当清洗,然后烘干。 
3、新断开的断口或断面,一般不需要进行处理,以免破坏断口或表面的结构状态。有些试样的表面、断口需要进行适当的侵蚀,才能暴露某些结构细节,则在侵蚀后应将表面或断口清洗干净,然后烘干。
4、对磁性试样要预先去磁,以免观察时电子束受到磁场的影响。
5、对同一种镀膜材料,离子溅射镀膜质量好,能形成颗粒更细、更致密、更均匀、附着力更强的膜。
6、同一次装入电镜的样品,高度差不要超过1.5mm(包括同一块样品的表面高度也是如此)。对镶嵌块,断面样品等高度大的样品,千万不要对样品台平面聚焦,只能对样品上表面聚焦。


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