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CCK8试剂盒

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品牌
Goyoo
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  1. 24T
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  3. 96T
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沈阳莫德医药科技有限公司

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产品说明

目录号名称规格包装价格
GY025-100次Cell   Counting Kit100   次1ml
180
GY025-500次Cell   Counting Kit500   次5ml575
GY025-1000次Cell   Counting Kit1000   次10ml900
GY025-3000次Cell   Counting Kit3000   次30ml1800


产品简介:

Cell Counting Kit简称 

CCK 试剂盒,为MTT法的替代方法,是一种基于WST(水溶性四唑盐,化学名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。


CCK法与其它检测方法之间的比较:

细胞计数方法

MTT法

XTT法

WST-1法

CCK法

形成的formazan的水溶性

产品性状

粉末

2瓶溶液

溶液

1瓶溶液

使用方法

配成溶液后使用

现配现用

无需预制

无需预制

检测灵敏度

很高

很高

检测时间

较长

较短

较短

最短

检测波长

560-600nm

420-480nm

420-480nm

430-490nm

细胞毒性

高,细胞形态完全消失

很低,细胞形态不变

很低,细胞形态不变

很低,细胞形态不变

试剂稳定性

一般

较差

一般

很好

大批量样品检测

可以

非常适合

非常适合

非常适合

便捷程度

一般

便捷

便捷

非常便捷

 

CCK用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验


操作说明:

一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时)

1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。

2、按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每组3-6个复孔。

3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK试剂培养一定时间后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),  OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要  一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK后的培养时间。)


二、细胞活性检测

1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在37℃,5% CO2的条件下)。

2、向每孔加入10 μL的CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

5、如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。


三、细胞增值-毒性检测

1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(在37℃,5% CO2的条件下)。

2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。

3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。

4、向每孔加入10μL CCK溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。

5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。

7、如果暂时不测定OD值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24小时内吸光度不会发生变化。

注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

 备注:

 ①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。
 ②有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔减的差异。加入CCK试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基
页面下加,容易产生气泡,会干扰OD值读数。

 ③白细胞可能需要培养较长时间。
 ④当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推
荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK溶液。

 ⑤如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。                              

 ⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时,通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不会对检测造成影响。


活力计算:

细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)] ×100
A(加药):具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度
A(0加药):具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度
*细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力   

1.一个孔中应接种多少个细胞当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。


保存条件:4℃干燥避光保存,有效期一年。


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